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LC-MS/MS检测38种抗生素浓度的分析方法

一、实验目的

LC-MS/MS检测38种抗生素浓度

二、仪器

设备名称

仪器编号

型号

液质联用仪

E-PC-064/E-PC-065

AB6500+/EXIONLC ADMP

冷冻离心机

E-QR-039

5430R

漩涡振荡器

E-QR-040

VORTEX-2 GENI

电子天平

E-QR-012

BT 25S

三、标曲制备

抗生素系列标准浓度如下

名称

标曲浓度

Sulfachloropyridazine

0.020.050.10.20.51251020 ng/mL

Sulfadiazine

Sulfapyridine

Sulfathiazole

Lincomycin hydrochloride

Sulfamethizole

Roxithromycin

Sulfamonomethoxine

Sulfamethazine

Sulfamethoxazole

Sulfadimethoxine

Sulfaquinoxaline

Clindamycin hydrochloride

0.060.150.30.61.536153060 ng/mL

Tylosin

Azithromycin

Erythromycin

Trimethoprim

Danofloxacin

Sarafloxacin

Difloxacin

Enrofloxacin

Fleroxacin

Ciprofloxacin

Sparfloxacin

Norfloxacin

Pefloxacin mesylate

Ofloxacin

Lomefloxacin

Chlortetracycline hydrochloride

0.20.5125
102050100200 ng/mL

Tetracycline hydrochloride

Oxytetracycline hydrochloride

Doxycycline hydrochloride hemiethanolate hemihydrate

Carbadox

Rifampicin

Sulfacetamide

Chloramphenicol

Thiamphenicol

Florfenicol

四、样品制备

土壤样品预处理:称取约4 g土壤样品于 50 mL 离心管中,加入20 mL乙腈-McIlvaine缓冲液的混合液,在摇床上混匀30 min,静置离心10 min3000 rpm4℃,离心)。收集上清液,重复提取一次合并提取液。以1000 ml纯水稀释提取液,并用4 mol/L硫酸调节pH值至3左右,加入10 μL 浓度为10 ng/mL的同位素内标(磺胺吡啶-D4、罗红霉素-D7、磺胺间二甲氧嘧啶-D4)。

样品富集:将固相萃取柱固定在固相萃取装置上,依次用10 ml甲醇和10 ml纯化水活化萃取柱,保证柱头浸润,预处理样品全部上样,用5 ml甲醇洗脱两次,收集全部洗脱液。洗脱液采用氮气缓慢吹至近干,用50%甲醇定容至0.1 mL,超声5min,涡旋10 min,离心10min15000 rpm4℃),取上清液进行液质检测。

五、分析方法

色谱条件

Total Time (min)

Flow Rate (μL/min)

A%-0.1%FA+2mM乙酸铵

B%-ACN

0.00

400

95

5

0.50

88

12

5.50

55

45

6.00

55

45

6.10

95

5

8.00

 

95

5

运行时间

8 min

柱温

40℃

进样量

5 μL

色谱柱

C18 2.7 μm 3.0*75 mm

质谱条件

参数名称

参数设置

离子源

电喷雾离子化源(ESI

扫描时间

8 min

离子源电压

5500 V(正离子)

离子源温度

550 °C

气帘气(CUR

35 psi

喷雾气(Gas 1

50 psi

辅助加热气(Gas 2

50 psi

碰撞气(CAD

MediμM

检测模式

MRM多离子反应监测

 

离子对

中文名称

英文名称

Q1

Q3

DP

CE

阿奇霉素

 Azithromycin-1

749.6

591.5

80

41

 Azithromycin-2

749.6

573.5

80

46

红霉素

 Erythromycin-1

734.4

576.4

60

29

 Erythromycin-2

734.4

158.2

60

41

罗红霉素

 Roxithromycin-1

837.5

679.4

60

31

 Roxithromycin-2

837.5

158.2

60

41

林可霉素盐酸盐

 Lincomycin hydrochloride-1

407.3

126.3

50

34

 Lincomycin hydrochloride-2

407.3

359.3

50

27

盐酸克林霉素

 Clindamycin hydrochloride-1

425.2

377.3

50

27

 Clindamycin hydrochloride-2

425.2

126.2

50

35

泰乐菌素

 Tylosin -1

916.6

772.4

30

43

 Tylosin -2

916.6

173.9

30

49

甲氧苄氨嘧啶

 Trimethoprim-1

291.2

230.2

95

33

 Trimethoprim-2

291.2

261.2

95

35

磺胺甲恶唑

 Sulfamethoxazole-1

254

156

25

23

 Sulfamethoxazole-2

254

108

25

33

磺胺二甲基嘧啶

 Sulfamethazine-1

279

186

67

24

磺胺间二甲氧嘧啶

 Sulfadimethoxine-1

311

156

65

29

 Sulfadimethoxine-2

311

108

65

40

磺胺间甲氧嘧啶

 Sulfamonomethoxine-1

281

156

65

25

 Sulfamonomethoxine-2

281

215

65

27

磺胺喹恶啉

 Sulfaquinoxaline-1

301.1

156

45

24

 Sulfaquinoxaline-2

301.1

108.1

45

36

磺胺嘧啶

 Sulfadiazine-1

251.1

156.1

35

21

 Sulfadiazine-2

251.1

108

35

34

磺胺吡啶

 Sulfapyridine-1

250.1

184

35

21

 Sulfapyridine-2

250.1

156

35

21

磺胺甲噻二唑

 Sulfamethizole-1

271

156

25

22

 Sulfamethizole-2

271

108

25

37

磺胺氯哒嗪

 Sulfachloropyridazine-1

285

156

35

22

 Sulfachloropyridazine-2

285

107.9

35

34

磺胺醋酰

 Sulfacetamide-1

215

92

20

33

 Sulfacetamide-2

215

108

20

28

磺胺噻唑

 Sulfathiazole -1

256.2

156

25

22

 Sulfathiazole -2

256.2

108

25

33

达氟沙星

 Danofloxacin-1

358.1

340.1

100

34

 Danofloxacin-2

358.1

314

100

27

沙拉沙星

 Sarafloxacin-1

386.2

342.2

70

28

 Sarafloxacin-2

386.2

368.2

70

32

双氟沙星

 Difloxacin-1

400.2

356.2

80

29

 Difloxacin-2

400.2

299

80

41

恩诺沙星

 Enrofloxacin-1

360.2

316.2

80

27

 Enrofloxacin-2

360.2

245.2

80

39

氟罗沙星

 Fleroxacin-1

370.2

326.2

65

28

 Fleroxacin-2

370.2

269.1

65

38

环丙沙星

 Ciprofloxacin-1

332.1

314.1

62

30

 Ciprofloxacin-2

332.1

288.2

62

28

司帕沙星

 Sparfloxacin-1

393.1

349

100

30

 Sparfloxacin-2

393.1

292.1

100

37

诺氟沙星

 Norfloxacin-1

320.2

276.2

70

26

 Norfloxacin-2

320.2

233.1

70

36

甲磺酸培氟沙星

 Pefloxacin mesylate-1

334.1

316.1

70

33

 Pefloxacin mesylate-2

334.1

290.1

70

26

氧氟沙星

 Ofloxacin-1

362.1

318

80

29

 Ofloxacin-2

362.1

261.1

80

38

洛美沙星

 Lomefloxacin-1

352.1

265

75

34

 Lomefloxacin-2

352.1

308.1

75

25

盐酸金霉素

Chlortetracycline hydrochloride-1

479.1

444.1

60

31

Chlortetracycline hydrochloride-2

479.1

462.2

60

25

盐酸四环素

Tetracycline hydrochloride-1

445.1

410.1

45

29

Tetracycline hydrochloride-2

445.1

428.1

45

25

盐酸土霉素

Oxytetracycline hydrochloride-1

461.1

426

52

29

Oxytetracycline hydrochloride-2

461.1

443.1

52

19

强力霉素单盐酸半乙醇半水合物

Doxycycline hydrochloride hemiethanolate hemihydrate-1

445.2

428.1

50

26

Doxycycline hydrochloride hemiethanolate hemihydrate-2

445.2

410

50

30

利福平

 Rifampicin-1

823.4

791.6

70

26

 Rifampicin-2

823.4

399.1

70

37

卡巴多

 Carbadox-1

263.1

231.1

80

20

 Carbadox-2

263.1

130.4

80

29

氯霉素

 Chloramphenicol-1

323.1

275

30

21

甲砜霉素

 Thiamphenicol-1

356.2

338.2

100

14

 Thiamphenicol-2

356.2

307.9

53

23

氟苯尼考

 Florfenicol-1

358.2

340

70

13

 Florfenicol-2

358.2

310

60

23

磺胺吡啶-D4

Sulfapyridine-D4-1

254.1

160.2

35

24

Sulfapyridine-D4-2

254.1

188.1

35

25

罗红霉素-D7

Roxithromycin-D7-1

844.6

686.3

60

32

Roxithromycin-D7-2

844.6

158.2

60

44

磺胺间二甲氧嘧啶-D4

Sulfadimethoxypyrimidine-D4-1

315.2

218.1

100

28

Sulfadimethoxypyrimidine-D4-1

315.2

156.1

100

36

 

 

服务项目 项目细分 参考标准 方法
抗生素测试 大环内脂类 红霉素 实验室SOP HPLC/LC-MS
罗红霉素 实验室SOP HPLC/LC-MS
洁霉素(林可霉素) 实验室SOP HPLC/LC-MS
阿奇霉素 实验室SOP HPLC/LC-MS
泰勒霉素 实验室SOP HPLC/LC-MS
克林霉素 实验室SOP HPLC/LC-MS
磺胺类 磺胺甲噻二唑 实验室SOP HPLC/LC-MS
磺胺吡啶 实验室SOP HPLC/LC-MS
磺胺醋酸酰胺 实验室SOP HPLC/LC-MS
磺胺氯达嗪钠 实验室SOP HPLC/LC-MS
磺胺嘧啶 实验室SOP HPLC/LC-MS
磺胺间甲氧嘧啶 实验室SOP HPLC/LC-MS
磺胺甲恶唑 实验室SOP HPLC/LC-MS
磺胺间二甲氧嘧啶 实验室SOP HPLC/LC-MS
磺胺二甲基嘧啶 实验室SOP HPLC/LC-MS
甲氧苄啶 实验室SOP HPLC/LC-MS
磺胺噻唑 实验室SOP HPLC/LC-MS
磺胺喹噁啉 实验室SOP HPLC/LC-MS
喹诺酮类 氧氟沙星 实验室SOP HPLC/LC-MS
诺氟沙星 实验室SOP HPLC/LC-MS
环丙沙星 实验室SOP HPLC/LC-MS
恩诺沙星 实验室SOP HPLC/LC-MS
洛美沙星 实验室SOP HPLC/LC-MS
氟罗沙星 实验室SOP HPLC/LC-MS
双氟沙星 实验室SOP HPLC/LC-MS
沙氧沙星(沙拉沙星) 实验室SOP HPLC/LC-MS
四环素类 盐酸强力霉素 实验室SOP HPLC/LC-MS
四环素(盐酸盐) 实验室SOP HPLC/LC-MS
氧四环素(土霉素) 实验室SOP HPLC/LC-MS
氯四环素 实验室SOP HPLC/LC-MS
氯霉素 氯霉素 实验室SOP HPLC/LC-MS
氟苯尼考 实验室SOP HPLC/LC-MS
甲砜霉素 实验室SOP HPLC/LC-MS
利福平 实验室SOP HPLC/LC-MS
β酰胺类 青霉素G 实验室SOP HPLC/LC-MS
阿莫西林 实验室SOP HPLC/LC-MS
氨苄西林 实验室SOP HPLC/LC-MS
氯唑西林 实验室SOP HPLC/LC-MS
苯唑西林 实验室SOP HPLC/LC-MS
双氯西林 实验室SOP HPLC/LC-MS
头孢呋辛 实验室SOP HPLC/LC-MS
头孢喹跨 实验室SOP HPLC/LC-MS
头孢洛宁 实验室SOP HPLC/LC-MS
头孢唑林 实验室SOP HPLC/LC-MS
头孢哌酮 实验室SOP HPLC/LC-MS
头孢匹林钠 实验室SOP HPLC/LC-MS
其他 甲稀土霉素 实验室SOP HPLC/LC-MS
达诺沙星 实验室SOP HPLC/LC-MS
马波沙星 实验室SOP HPLC/LC-MS
培氟沙星 实验室SOP HPLC/LC-MS
卡巴多 实验室SOP HPLC/LC-MS
竹桃霉素 实验室SOP HPLC/LC-MS
北里霉素 实验室SOP HPLC/LC-MS
盐霉素 实验室SOP HPLC/LC-MS
甲基盐霉素 实验室SOP HPLC/LC-MS
莫能菌素 实验室SOP HPLC/LC-MS
奥美普林 实验室SOP HPLC/LC-MS
新生霉素 实验室SOP HPLC/LC-MS
杆菌肽 实验室SOP HPLC/LC-MS

项目简介

38种兽药{抗生素}残留测试

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